Биотин (витамин Н).

В химическом отношении биотин представляет собой гексагидро-2-оксо-1Н-тиено [3,4-d]-имидазол-4-пентановую кислоту, соединение, содержащее конденсированную гетероциклическую систему имидазолового и тиофенового колец с остатком н-валериановой кислоты. Благодаря наличию 3 асимметрических атомы углерода возможны 8 оптических изомеров биотина и 4 рацемата. Биологической активностью обладает только природный  d(+)-биотин, остальные изомеры витаминными свойствами не обладают.

d(+)-Биотин кристаллизуется из воды в виде бесцветных тонких игл с температурой плавления 232,5°С, а из 80%-ного спирта – в виде призм, плавящихся при 230°С. Биотин плохо растворим в воде и спирте (22 и 88 мг в 100 мл при 25°С). В эфире, хлороформе и других органических растворителях биотин практически нерастворим. Биотин довольно устойчив, в том числе при нагревании в разбавленных растворах кислот и оснований, однако разрушается в концентрированных кислотах и щелочах.

Биотин – важный фактор питания, играющий существенную роль в метаболизме, как человека, так и животных. Биотин относится к так называемым, микровитаминам и в качестве кофермента принимает непосредственное участие в процессах глюконеогенеза, биосинтеза жирных кислот, а также метаболизме аминокислот. Дефицит биотина у млекопитающих ведет к задержкам роста, потере аппетита и ухудшению усвоения пищи. Первым сигналом неблагополучия может стать изменение кожи: сухость, дерматиты, шелушение, выпадение волос. Позже появляется вялость, сонливость, быстрая утомляемость, снижение аппетита, ухудшение настроения и работоспособности. В тяжелых случаях возникают поражения сосудов и печени, нарушается процесс утилизации глюкозы в организме, повышается уровень холестерина. На поздних стадиях авитаминоза могут наблюдаться даже признаки паралича. Суточная потребность биотина – 50-150 мкг.

Биотин довольно широко распространен в природе. Особенно богаты им дрожжи (100-200 мкг/100 г), печень и почки (90 – 100 мкг/100 г), а из растительных продуктов – горох и овсяная крупа (20мкг/100 г). Содержание биотина в молочных продуктах 3-5 мкг/100 мл, в куриных яйцах – 20 мкг/100г, в хлебобулочных изделиях 1,2 – 2,5 мкг/100 г, в зеленом горошке – 5,3 мкг/100 г, в большинстве овощей и фруктов – в пределах 0,1 – 1,5 мкг/100 г.

Для количественного определения биотина предложены колориметрические методы. Один из них основан на гидролизе биотина в концентрированной кислоте и определении образующейся диаминокарбоновой кислоты по цветной реакции с нингидрином. Во втором методе используется специфическая цветная реакция на уреидный цикл биотина с n-диметиламиноцинамальдегидом. Чувствительность этих методов не очень велика: 100 и 10 мкг/г.

Очень чувствительны (0,025-0,5 нг/г) микробиологические методы. Микробиологических методов разработано довольно много, и все они различаются тест-организмами, процедурой анализа и по способу измерения ростовой реакции. В качестве тест-организмов используют Lactobacillum planetarium 8014 ATCC, Saccharomyces cerevisiae 7754 ATCC, Neurospora crassa и др.  Однако, необходимо учитывать, что микроорганизмы способны использовать не только биотин, но и некоторые его аналоги и метаболиты, не активные для человека, что затрудняет определение истинного содержания биотина в биологических объектах и является одной из причин большой вариабельности получаемых данных. Кроме того, в присутствии ненасыщенных жирных кислот микробиологические методы могут давать ложноположительные результаты.

В последнее время для анализа биотина применяется более удобный и быстрый иммуноферментный метод анализа.

Испытательный центр  «Битекс» проводит  количественное определение биотина в пищевых продуктах, премиксах, кормах и витаминизированных продуктах питания и витаминных препаратах с помощью тест-системы для иммуноферментного анализа  RIDASCRIN®BIOTIN (производство фирмы R-Biopharm, Германия).

В основе процедуры анализа лежит высокоспецифичное взаимодействие биотина с авидином.

Предел обнаружения биотина составляет от 0,370 нг/г до 0,500 нг/г в зависимости от типа пробы.

Мешающим анализу фактором может быть присутствие в пробе витамина С (более, чем 1 мг/г). В этом случае рекомендуется выполнять ферментативный гидролиз пробы аскорбат-оксидазой.